Como identificar bactérias de frutas em ágar nutritivo com cotonete

Bactérias são encontradas em toda parte e são fáceis de coletar e cultivar. O método mais comum de cultivar bactérias é em placas de Petri contendo ágar. O ágar contém nutrientes que permitem que microrganismos, como bactérias, cresçam em grande número. Isso ajuda o cientista ou aluno a visualizar o número e tipo de culturas na placa de ágar.

O que você vai precisar

• Luvas de proteção
• Fruta
• Placas de Petri parcialmente preenchidas com ágar
• Bico de Bunsen
• Agulha de inoculação
• Incubadora
• Tabela ou livro de identificação de bactérias
• Lâminas de vidro
• Água destilada
• Suporte de lâminas
• Recipiente plástico tipo tina
• Corante violeta de cristal
• Álcool etílico 95%
• Microscópio composto

Instruções

1. Coloque suas luvas de proteção de laboratório. Pegue a alça de inoculação e o pedaço de fruta.

2. Acenda o bico de Bunsen e coloque a alça de inoculação sobre a chama. Certifique-se de que a alça fique vermelha para matar quaisquer bactérias já existentes na alça.

3. Pegue a alça de inoculação e esfregue-a contra a fruta. Abra imediatamente uma placa de Petri fresca contendo ágar e risque o ágar com a alça. Após riscar, coloque a alça sobre a chama novamente para remover quaisquer bactérias. Recoloque a tampa na placa de Petri.

4. Repita estes passos para duas placas de ágar adicionais. Você quer ter mais de uma placa para comparar seus resultados.

5. Coloque as placas de ágar em uma incubadora a 37 graus (Celsius) por 48 horas.

6. Remova as placas da incubadora e anote o número, cor e forma das colônias que se formaram nas placas de ágar. Consulte uma tabela ou livro de identificação de bactérias para ajudar a estabelecer o tipo de colônia.

7. Pegue a alça de inoculação, coloque-a sobre a chama do bico de Bunsen, e passe-a sobre uma das colônias em suas placas de ágar. Espalhe a alça sobre uma lâmina de vidro. Adicione uma gota de água destilada à lâmina e deixe a lâmina secar. Coloque a lâmina brevemente sobre a chama do bico de Bunsen para fixar a amostra.

8. Coloque a lâmina no suporte de lâminas dentro do recipiente plástico e cora as lâminas com a coloração de Gram por um minuto. A coloração de Gram requer colocar gotas da coloração sobre a lâmina. O recipiente plástico pegará qualquer coloração que caia da lâmina. A coloração tornará mais fácil visualizar as bactérias e você poderá determinar se elas são bactérias Gram-positivas ou Gram-negativas.

9. Lave a lâmina com água destilada. Lave a lâmina com álcool etílico 95% para remover a cor das bactérias com paredes celulares finas. Lave novamente com água destilada.

10. Visualize a lâmina sob o microscópio composto. Bactérias Gram-positivas serão roxo escuro com paredes celulares grossas. Bactérias Gram-negativas serão roxo claro com paredes celulares finas. Certifique-se de anotar as formas e números de bactérias também.