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Cultura de Linfócitos T: Métodos, Fontes e Aplicações

Biologia das Células T

As células T (linfócitos T) originam-se de células-tronco da medula óssea e amadurecem no timo. Distinguem-se pelo receptor de antígeno (TCR). Subconjuntos expressam marcadores como CD4 (células T auxiliares) e CD8 (citotóxicas), cada um com função imune distinta.

Fontes de Células T para Cultura

• Baço
• Linfonodos
• Timo
• Sangue periférico – fonte mais acessível e comum

Amostras de sangue são rigorosamente triadas para infecções e manipuladas em cabines de segurança biológica.

Isolamento por Gradiente de Densidade

1. Adiciona-se solução salina neutra à amostra de sangue.
2. Sobrepõe-se solução de Ficoll-Isopaque (densidade entre linfócitos e eritrócitos).
3. Centrifugação forma camadas: plasma (topo), células mononucleares (incl. células T), Ficoll, eritrócitos/granulócitos (base).
4. Coleta-se a camada de células mononucleares.
5. Lavagem e centrifugação adicional; contagem de viabilidade.
6. Uso imediato ou criopreservação.

Criopreservação

• Meio: meio de cultura + 10-13% albumina sérica humana (HSA) + 10% DMSO
• DMSO previne desidratação, alterações de pH e concentração eletrolítica durante congelamento.
• Células ressuspensas em meio + HSA em criotubo; DMSO adicionado lentamente.
• Congelamento gradual em recipiente com isopropanol (≈ -1°C/min) antes de armazenamento em nitrogênio líquido ou -80°C.

Descongelamento

1. Incubação rápida a 37°C.
2. Adição lenta de meio de descongelamento (duplo do volume).
3. Transferência para tubo, centrifugação.
4. Opcional: Benzonase no meio para evitar aglomeração de células mortas.
5. Ressuspensão em meio de cultura; avaliação de viabilidade.
6. Prontas para experimentos.

Aplicações

• Estudos de resposta imune a vacinas
• Testes de citotoxicidade
• Pesquisa em imunoterapia (ex.: CAR-T)
• Ensaios de proliferação e citocinas