Entendendo e Otimizando Buffers de Bloqueio para Imunoquímica

Função dos Buffers de Bloqueio

Buffers de bloqueio estabilizam proteínas revestidas em ensaios de imunoquímica e, segundo Immunochemistry Technologies, reduzem ruído nos resultados, aumentam sensibilidade, eficiência e vida útil das placas revestidas, e melhoram reprodutibilidade. Inibem ligação inespecífica após proteínas/anticorpos ligarem-se e absorverem na placa do ensaio durante ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Como ELISAs podem ser construídos de formas diferentes, há várias opções de buffers para necessidades individuais.

Materiais Necessários

• Amostra de anticorpo
• Amostra de proteína
• Placa de ensaio
• Buffer de bloqueio
• Béqueres de laboratório
• Pipeta

Passos do Procedimento

1. Selecione buffer de bloqueio conforme tipo de ELISA:
   • General blockers (scaffold proteico mamífero): sandwich e antigen-down ELISAs.
   • BB2 Neptune blocking (scaffold proteico não-mamífero): ELISAs para espécies humanas/mamíferas.
   • BB3 Synblocks (scaffolds moleculares sintéticos pequenos): ELISAs de bloqueio de alta força.
   • BB4 Phosph-free (scaffolds sintéticos pequenos, livres de fósforo): ELISAs com ligação não-específica alta de conjugados enzimáticos. Útil em ensaios com fosfatase alcalina, placas quimicamente tratadas/vidro, microfluidics (Immunochemistry Technologies).
2. Revestir placa com antígeno (proteína) ou anticorpo vertendo solução.
3. Aspire (remova) solução de revestimento inclinando placa; excesso em recipiente separado.
4. Pipete 300-400 µL de buffer de bloqueio em cada poço da placa.
5. Incube ~3 horas ou overnight a temperatura ambiente (4°C). Segundo Cell Technology, buffer correto conserva reagentes (valiosos, caros, escassos).
6. Lave excesso de proteína para remover quantidades excessivas que podem reduzir detecção do antígeno-alvo (Pierce Net).
7. Reação completa: placa pronta com quantidade correta de anticorpo ligado a antígeno → resultados consistentes, redução variação placa-a-placa em ensaios comparativos grandes.
8. Para microarrays: use solução avançada como Array It's Block It Buffer, projetada para inativar grupos reativos remanescentes após "print" de substratos em slides super-epoxi, super-amina, super-aldeído, mantendo nitidez do sinal, prevenindo fluorescência e facilitando redução de ruído. Vida útil 1 ano se armazenado corretamente, pureza extrema, concentrado pronto para uso.