Como bloquear amortecedores

tampões de bloco são utilizados para estabilizar proteínas em ensaios de imunoquímica revestidos e , de acordo com Immunochemistry Technologies , reduzem o ruído nos resultados de ensaios individuais , aumentar a sensibilidade do ensaio , aumentar a eficiência e a vida de prateleira das placas revestidas e melhorar a reprodutibilidade . Tampões Bloco inibir a ligação não específica após as proteínas e anticorpos foram reunidas e foi absorvida sobre a placa de ensaio revestida durante um teste ELISA ( ensaio de imunossorvente ligado a enzima ) . Porque ELISA pode ser construído de diferentes maneiras , existem várias opções de bloqueio de buffers para atender às necessidades individuais de um técnico. Coisas que você precisa
amostra Anticorpo
amostra Protein
placa de ensaio
Tampão de bloqueio
Taças do laboratório
Pipeta
Show Mais instruções
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Selecione seu tampão de bloqueio , dependendo do tipo de ELISA você estará realizando . Escolhas de tampão incluem: bloqueadores gerais ( andaime proteínas de mamíferos ) para sanduíche e antígeno -down ELISA ; BB2 netuno bloqueio (andaime proteínas de não mamíferos ) para os testes ELISA de espécies de mamíferos e humanos ; Synblocks BB3 (andaimes pequenos sintéticos moleculares ) para de alta resistência ELISA de bloqueio ; e BB4 ( sintéticos , andaimes pequenos sem fósforo moleculares ) para os testes ELISA de ligação de alta conjugado marcado com enzima , não-específica sem fosf . O bloqueador de tampão BB4 é especificamente úteis em testes que usam fosfatase alcalina, quimicamente tratados ou placas de reação de vidro e em microfluídica , conforme relatado pelo Imunoquímica Technologies, uma empresa que fornece todos os equipamentos de ensaio relevante.
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Cubra a placa de ensaio com o antígeno (proteína) ou o anticorpo derramando a solução através das placas.
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Aspirar (remover) a solução de revestimento por depósito da placa de modo que o excesso é descartado num recipiente separado .
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pipeta de 300 a 400 microlitros de tampão de bloqueio a cada poço da placa de ensaio utilizando uma pipeta .
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Incubar as soluções para em torno três horas ou durante a noite à temperatura ambiente ( 4 ) graus Celsius . Segundo a empresa Cell Technology , ao buffer do bloco para a direita vai conservar seus reagentes , o que pode ser valioso porque eles são caros e podem estar em falta .
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Lave o excesso de proteína para remover quantidades excessivas como isto pode reduzir a detecção do seu antigénio alvo , tal como relatado por Pierce líquido .
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neste ponto , a reacção está completa e não deverá ter uma placa acabada contendo a quantidade certa de anticorpo ligado ao antigénio , o que dará resultados consistentes e reduzir a variação chapa -chapa em grandes ensaios , comparativos.
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no caso de um microarray , use uma solução de bloqueio avançado como Array é Bloquear Ele buffer, que foi projetado especificamente para inativar quaisquer grupos reativos que permanecem após um "print" de substratos em lâminas contendo super- epóxi , super -amina e super- aldeído , mantendo a nitidez do sinal resultante , impedindo fluorescência e facilitando a redução de ruído. Este reagente tem uma vida útil de um ano, se corretamente armazenado, é extremamente puro e é fornecido como um concentrado pronto para uso.