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O protocolo TMRE

Tetrametilrodamina etil (TMRE) é um "corante de redistribuição fluorescente catiônico lipofílico lento" usado no Kit de Avaliação do Potencial de Membrana Mitocondrial MitoPT™ TMRE/TMRM, fabricado pela ImmunoChemistry Technologies, LLC. O processo ajuda a visualizar um gradiente de potencial elétrico transmembrana em células.

Preparação do ensaio

O protocolo é simples de seguir e leva aproximadamente 20 minutos para processar a 37 graus Celsius. As células vivas usadas no ensaio podem levar entre várias horas e vários dias para preparar para uso. As células controle podem levar várias horas para preparar, pois precisam ser induzidas a sofrer apoptose.

Protocolo Parte 1

Cultive células até uma densidade ótima para indução de apoptose ou estresse oxidativo, de acordo com seu protocolo de indução específico, mas não excedendo 10⁶ células/mL.

Protocolo Parte 2

Ao mesmo tempo, cultive uma população de células controle não induzida (na mesma densidade da população induzida).

Protocolo Parte 3

Induza apoptose ou despolarize propositalmente as mitocôndrias seguindo seu protocolo desejado.

Protocolo Parte 4

Prepare Buffer de Ensaios/Lavagem 1X.

Protocolo Partes 5 a 8

• Parte 5: Prepare o estoque 1 mM ou 0,2 mM de MitoPT™ TMRE/TMRM.
• Parte 6: Prepare diluição 1:100 do 1 mM ou 1:20 do 0,2 mM MitoPT™ TMRE/TMRM para adição às culturas celulares.
• Parte 7: Corar células usando concentração final de 20-200 nM de MitoPT™ TMRE/TMRM.
• Parte 8: Analise os dados.