O protocolo TMRE

tetrametilrodamina acetato ( TMRE ) é um " , lipofílico , catiónico corante fluorescente reditribution lento " utilizado no Kit de Avaliação Potencial MitoPT ™ TMRE /TMRM Membrana Mitocondrial , fabricado por imunoquímica Technologies, LLC . O processo ajuda a visualizar uma transmembrana gradiente de potencial elétrico nas células. Preparando o Ensaio

O protocolo é simples de seguir, e leva aproximadamente 20 minutos para processar a 37 graus Celsius. As células vivas utilizadas no ensaio pode levar entre algumas horas e vários dias para se preparar para utilização . As células de controle pode levar várias horas para se preparar , pois eles precisam ser induzidos a apoptose .
Protocolo Parte 1

células de cultura para uma ótima densidade para apoptose ou indução de estresse oxidativo , de acordo com o seu protocolo de indução específica, mas que não exceda 10 (6) células /mL.
Protocolo Parte 2

ao mesmo tempo, a cultura de uma população não- induzido controle negativo celular (com a mesma densidade que a população induzido.
Protocolo Parte 3

induzir a apoptose ou propositadamente despolarizar a mitocôndria seguinte o protocolo desejado .
Protocolo Parte 4

Prepare 1X Ensaio /Wash buffer.
Protocolo Parts 5-8

Prepare a 1 mM ou 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM estoque. Para Protocolo Parte 6 , preparar uma diluição de 1:100 de 1 mM, ou uma diluição do 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM 01:20 solução para cravar em amostras de cultura de células .

Para Protocolo Parte 7 , as células mancha usando uma concentração final de 20-200 nM de solução MitoPT ™ TMRE /TMRM .

Para Protocolo Parte 8 , analisar o dados.