Como executar um teste de Allium Cepa

Cebola (Allium cepa) são usados para avaliar os riscos ambientais , permitindo que as raízes em desenvolvimento a entrar em contacto com as substâncias a serem testadas . Após a exposição suficiente , as raízes são retirados , manchado e maceradas para que os cromossomos das células pode ser visto sob um microscópio de luz . A toxicidade é evidenciada se forem detectadas anormalidades cromossômicas ou anomalias de divisão celular . Dicas de raiz são usados porque as células lá estão crescendo e dividindo ativamente , dando uma boa oportunidade para ver os cromossomos durante as diferentes fases de divisão celular. Coisas que você precisa
Cebolas
Faca
Water Fotografia de copos ou outros recipientes para armazenar líquidos e cebolas
Teste líquidos
lâmina de barbear ou bisturi
frascos
Aceto - álcool fixador
lâminas de microscópio
capa desliza ácido clorídrico

aço inoxidável haste de maceração
Carbol mancha fucsina
mancha Aceto - orceína
ácido acético
bálsamo do Canadá
microscópio de luz
apego Câmera para microscópio
Show Mais instruções
Configurando o Teste
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Retire a pele seca externa de 12 cebolas. Raspe o fundo da cebola em torno das placas de fundo , sem danificar a zona a partir da qual as raízes irão emergir .
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Escolha copos que têm uma boca larga o suficiente para manter a parte inferior das cebolas imersos no teste líquidos . Encher os copos com água destilada e colocar as cebolas nas provetas em contacto com a água . Proteger os lados das provetas com uma película de alumínio para simular escuridão subterrânea . Troque a água diariamente .
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Examine as bases de cebola após dois dias. Raízes deve ter se formado. Avaliar o crescimento das raízes e descartar as duas cebolas com o crescimento radicular mais fraco.
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Configurar uma segunda série de cinco copos , cada um contendo uma amostra do material a ser testado , como canalização ou no escoamento industrial . Coloque cinco das cebolas para esses copos . Guarde os outros cinco em água destilada como controle do teste. Permitir que as raízes a crescer por mais 24 horas .
Preparando as raízes
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Com um bisturi ou lâmina de barbear , colheita 05:55 pontas das raízes de cada cebola, gravação que eram controles e quais eram os assuntos de teste . Mantenha raízes de cebola individuais separados em pequenos frascos rotulados.
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pontas das raízes Fix imediatamente em aceto - álcool em uma proporção de 1:3 . Coloque as pontas de raiz para uma cebola numa lâmina de microscópio e macerar los em ácido clorídrico 1 N , o qual é o mesmo que o ácido clorídrico 1 molar , a 60 graus centígrados durante três minutos . Mancha dicas macerados com mancha carbol fucsina , uma mistura de fenol e fucsina básica que se liga a elementos em paredes celulares para que eles se tornam mais visíveis sob microscopia de luz.
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Adicione 2 por cento aceto - orceína mancha em 4 por cento de ácido acético . Este cores dos cromossomos . Mexer com a vara de maceração . Aplicar um deslizamento tampa, pressionando-o para baixo para esmagar as pontas das raízes . Ou selar as bordas com secagem rápida unha polonês ou montar permanentemente os preparativos em bálsamo do Canadá , resina da árvore de abeto balsâmico misturado tanto com óleos essenciais ou xileno . Número os slides para que os resultados serão gravados , mas não aparente se cada um é um assunto de teste ou um controle.

Registrando resultados
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Coloque a lâmina de microscópio no palco de um microscópio de luz. Examine o campo sob menor ampliação , a mudança para ampliações maiores para examinar os cromossomos .
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Anote as aberrações cromossômicas em uma folha de dados, registro de informações pelo número codificado para cada cebola. Incluir cromossomos incompletamente separados ou quebrados, micronúcleos ( núcleos extras formado perto do fim da divisão celular que pode conter detritos cromossômica ) , anéis de cromossomos e os cromossomos pegajosos e perturbado em diferentes fases de divisão celular. Fotografia de cada slide.
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Analisar os dados por meio de análise estatística. Interpretar os resultados para avaliar se é ou não a solução teste é genotóxico.