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Como Preparar Placas de Ágar LB (Lysogeny Broth) para Cultura Bacteriana

Ágar LB é meio de cultura rico, padrão para crescimento de E. coli e bactérias heterotróficas em biologia molecular. "LB" significa lysogeny broth (caldo de lisogenia) — não "Luria-Bertani", conforme esclareceu Giuseppe Bertani. A receita padrão (1 L) é simples e versátil.

Materiais e Reagentes (para 1 L)

• Béquer/Erlenmeyer 2 L (volume 2x o meio para evitar transbordamento na autoclavação)
• Cilindro graduado 1 L
• Água destilada ou deionizada: 1 L
• Triptona (peptona de caseína): 10 g
• Extrato de levedura: 5 g
• NaCl não iodado: 5 g
• Ágar bacteriological grade: 15 g
• Papel alumínio
• Luvas térmicas para autoclave
• Autoclave (ciclo líquido) ou panela de pressão
• Placas de Petri estéreis (90-100 mm)
• Balança analítica e papel de pesar

Procedimento

1. No Erlenmeyer, pese triptona, extrato de levedura e NaCl.
2. Adicione ~900 ml de água; agite para dissolver (o ágar ainda não).
3. Adicione os 15 g de ágar; agite vigorosamente para dispersar (não dissolverá totalmente a frio). Evite grumos no fundo.
4. Complete volume para 1 L com água. Sele com papel alumínio (frouxo para ventar).
5. Coloque em recipiente autoclavável com ~1 cm de água no fundo.
6. Autoclave: ciclo líquido, 121°C, ≥ 20 min (valide com indicador biológico).
7. Panela de pressão (se sem autoclave): máx. 250 ml por vez; 20 psi (~1,4 bar), 30 min. Risco maior de superaquecimento localizado.
8. Retire com luvas térmicas. Agite suavemente para homogeneizar o ágar derretido.
9. Resfrie até ~50-55°C (teste: dorso dos dedos na parede do frasco por 2 s sem desconforto). Agite a cada 10-20 min se volume ≥ 1 L.
10. Em fluxo laminar ou próximo à chama: abra tampa da Petri em ângulo (não vertical). Despeje ~15-20 ml/placa (meia altura).
11. Feche imediatamente. Deixe solidificar ~30 min à temperatura ambiente.
12. Armazene em saco estéril original ou recipiente vedado a 4°C (39-40°F). Use em até 4-6 semanas. Etiquete: meio, data, lote, operador.

Controle de Qualidade

• Verifique esterilidade: incubar 10% das placas a 37°C/24h — sem crescimento.
• Teste de crescimento: semear E. coli ATCC 25922 — colônias típicas em 18-24h.
• pH final: 7,0 ± 0,2 a 25°C.

Segurança: descarte de placas contaminadas por autoclavação antes do lixo comum. Use EPI completo.