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Protocolo de Preparação de Microssomos

Visão Geral

O interior da cell é extremamente complexo. Além do núcleo, há massa de membranas — retículo endoplasmático — que gerencia todas as funções metabólicas. Cientistas descobriram que a ruptura celular produz microssomos — pequenas vesículas feitas de retículo endoplasmático.

Métodos de Ruptura Celular

• Cientistas usam vários métodos: sonicadores, ciclos congelamento-descongelamento, homogeneizadores, detergentes e, para amostras maiores, liquidificadores. Centrifugam a suspensão em baixa velocidade para pellet de pedaços maiores (núcleos, células íntegras) — este pellet é descartado. A suspensão restante é centrifugada em alta velocidade para pellet de microssomos — ressuspensos em tampão para uso.

Considerações Importantes

• Antes de iniciar, considerar:
  1. Tipo celular — ex: fígado deve ser perfundido para remover sangue contaminante.
  2. Moléculas a estudar podem exigir temperatura específica para estabilidade.
  3. Microssomos podem ser separados em diferentes tamanhos; velocidade da centrífuga é crítica para obter a fração desejada.

Usos

• Pesquisadores usam microssomos para identificar e definir vias metabólicas características de diferentes tipos celulares. Como o fígado é o sítio metabólico em animais, cientistas — especialmente na indústria farmacêutica — usam microssomos hepáticos para estudar metabolismo de fármacos.