Mapa do Plasmídeo pcDNA3.1: Elementos-Chave para Expressão em Mamíferos

A família de plasmídeos pcDNA3.1 (Invitrogen/Thermo Fisher) é um vetor de expressão de mamíferos amplamente usado. Elementos-chave incluem:

Recursos principais

• Promotor CMV: promotor constitutivo forte para expressão de alto nível em células de mamíferos (não T7 — T7 é para transcrição in vitro).
• Sítio de clonagem múltiplo (MCS): flanqueado por sítios de restrição para clonagem direcional.
• Sinal de poliadenilação BGH: poliA do hormônio do crescimento bovino para estabilidade de mRNA e exportação nuclear.
• Origem SV40: para replicação episomal em células expressando antígeno T grande do SV40 (ex.: HEK293T).
• Origem f1: produção de DNA de fita simples para sequenciamento/mutagênese.
• Resistência a neomicina/kanamicana (Neo^R/Kan^R): seleção G418 em células de mamíferos; kanamicana para seleção bacteriana.
• Resistência a ampicilina (Amp^R): seleção bacteriana (β-lactamase).
• Origem ColE1: replicação de alta cópia em E. coli.
• Promotor T7: a montante do MCS para aplicações de transcrição in vitro (IVT).

Diferenças de versão

• pcDNA3.1(+): CMV → MCS → poliA BGH em orientação direta.
• pcDNA3.1(-): orientação reversa (útil para certas estratégias de clonagem).
• pcDNA3.1/V5-His, /myc-His, /HA: incluem epitopos e His₆ para detecção/purificação.
• pcDNA3.1/CT-GFP, /NT-GFP: variantes de fusão GFP.

Aplicações

Transfeção transitória/stável, geração de linhagem celular estável, expressão de proteína, estudos funcionais, produção de anticorpos. Alta cópia em E. coli facilita preparo de plasmídeo.

Nota: A descrição original listou incorretamente T7 como promotor de mamíferos. CMV é o promotor de mamíferos; T7 é para IVT.