casa |  | Saúde e Doença >  | Indústria da Saúde | Indústria da Saúde (Geral)

Protocolos de Western Blot

Contexto

Western blot (imunoanálise/protein blot) é usado diariamente em medicina, laboratórios de biologia e outras disciplinas científicas. Quando realizado corretamente, permite estudar expressão de proteínas em amostras de tecido. Como parâmetros variam entre amostras, vários protocolos devem ser seguidos para resultados precisos.

Principais Protocolos

Realização de Lavagens (Washes)

Após incubar membranas em soluções de anticorpos pelo tempo apropriado (varia conforme anticorpo), EnCor Biotechnology recomenda: 3 lavagens em temperatura ambiente com TBS. TBS = solução com composição e pH específicos para lavagem. Lavar entre cada introdução de nova solução de anticorpo.

Preparação da Mistura de Coloração (Staining)

Segundo WesternBlotting.org, preparar mistura imediatamente antes de aplicar à membrana garante melhores resultados. Tipos de soluções: algumas compradas, outras preparadas no laboratório.

• Quimioluminescência: mais informação por coloração, mas mais cara e requer câmara escura
• Peroxidase de Rábano (HRP) / Fosfatase Alcalina: outras opções
• Independente do método, preparo imediato antes do uso é essencial

Uso de Tampão (Buffer)

Após aplicar solução de coloração selecionada, o tampão é fundamental:

• Quimioluminescência: acetato sobre a coloração (WesternBlotting.org)
• HRP: acetato de amônio para obter produto de coloração marrom
• Fosfatase Alcalina: tampão mais complexo, cria coloração roxa; pode ser comprado pronto