Western blot Protocolos

A Western blot são um tipo de mancha de proteína que é usado na área médica , laboratórios de biologia e outras disciplinas científicas em uma base diária . Western blot , quando realizada corretamente, são uma forma de estudar a expressão da proteína em amostras de tecido . Porque pode haver diferenças nos parâmetros de cada amostra , há uma série de protocolos que devem ser seguidas para a obtenção de resultados precisos . Realizando Lavagens

Após incubação das membranas em soluções de anticorpos para o período de tempo apropriado , que varia dependendo de qual a solução de anticorpo está a ser utilizado , encor Biotecnologia indica que a membrana devem ser submetidos a três lavagens temperatura ambiente em TBS . TBS é uma solução que tem um pH específico e a composição de lavagem . A membrana deve ser lavado entre cada introdução de uma nova solução de anticorpos .
Preparação Mistura Coloração

Segundo WesternBlotting.org , preparando a mistura de coloração imediatamente antes de aplicar lo para o membro vai conseguir os melhores resultados. Existem vários tipos de soluções corantes , alguns dos quais podem ser comprados e alguns dos quais devem ser misturados no laboratório . Coloração Chemiluminescence , de acordo com Encor Biotecnologia, fornece a maioria das informações por mancha , mas também é o mais caro e exige uma câmara escura para o desenvolvimento . Peroxidase de rábano e fosfatase alcalina de coloração Blotting outras opções para a coloração . Independentemente de qual método é usado , a preparação da mistura antes do uso é essencial.
Usando um buffer

Depois de aplicar a solução de coloração selecionado , o uso de um buffer é fundamental. Na coloração quimiluminescência , aplicando um sobre a parte superior de etilo da solução de coloração é protocolo , de acordo com WesternBlotting.org . Peroxidase de rábano de coloração requer o uso de um tampão de acetato de amónio , a fim de obter o produto coloração castanha . O buffer usado em fosfatase alcalina Blotting , que deve criar um produto roxo coloração , é mais complicado de fazer e pode ser comprado já feito .