Raios X são uma forma de radiação eletromagnética com comprimentos de onda variando de aproximadamente 0,01 a 10 nanômetros — ordens de magnitude mais curtos que a luz visível (400–700 nm). Difração, a curvatura e espalhamento de ondas ao redor de obstáculos ou através de aberturas, ocorre mais prominentemente quando o comprimento de onda é comparável ao tamanho do obstáculo ou abertura.
Para que a difração seja observável, o obstáculo ou abertura deve estar na ordem do comprimento de onda. Objetos típicos — portas, janelas, cabelo humano, até partículas microscópicas — são vastamente maiores que os comprimentos de onda de raios X. Consequentemente, raios X viajam em linhas quase retas através de meios macroscópicos, projetando sombras nítidas em vez de produzir padrões de difração. Esta propriedade os torna ideais para imagem radiográfica.
Sólidos cristalinos têm uma estrutura atômica altamente ordenada e repetitiva com espaçamentos interplanares (d-spacings) na faixa de 0,1–1 nm — precisamente correspondendo aos comprimentos de onda de raios X. Quando raios X interagem com um cristal, eles são espalhados pelas nuvens eletrônicas de átomos de forma coerente e previsível. Interferência construtiva ocorre em ângulos específicos descritos pela Lei de Bragg:
nλ = 2d sin θ
onde n é um número inteiro, λ é o comprimento de onda, d é o espaçamento interplanar e θ é o ângulo de incidência. O padrão de difração resultante revela a disposição atômica do cristal.
Este princípio fundamenta a cristalografia de raios X, o método primário para determinar as estruturas tridimensionais de proteínas, ácidos nucleicos, fármacos e materiais. Medindo os ângulos e intensidades de feixes difratados, cientistas podem reconstruir mapas de densidade eletrônica e construir modelos atômicos. A técnica foi fundamental na biologia estrutural, desde a descoberta da dupla hélice do DNA até o design moderno de fármacos.