Como Isolar mRNA Bacteriano

Contexto

Ácido ribonucleico (RNA) é componente genético chave das células, frequentemente extraído por cientistas em experimentos genéticos complexos. Esse processo é chamado isolamento de RNA. Um tipo especial, mRNA, representa 1 a 5% do RNA total de uma célula e é particularmente útil. Até recentemente, não era possível isolar eficientemente mRNA de organismos procarióticos como bactérias devido à tecnologia de ligação usada. Avanços tecnológicos recentes produziram kits de laboratório permitindo isolamento de alto rendimento de mRNA bacteriano.

Materiais Necessários

• Laboratório de genética totalmente equipado
• Kit de Isolamento de mRNA Bacteriano (ex: MICROBExpress Bacterial mRNA Isolation Kit)

Procedimento

1. Disrupção Celular Bacteriana

   Escolha o método mais apropriado para disromper as células bacterianas. O melhor método depende das células; se duras, moa o material finamente para quebrar todas as paredes celulares. Métodos sônicos ou de agitação funcionam bem para líquidos ou tecidos semi-sólidos.

2. Desnaturação e Proteção do Material Genético

   Coloque o material celular disrompido em contato com solução desnaturante imediatamente para iniciar quebra e remoção de material genético. O tempo é essencial pois DNA e RNA decaem rapidamente. Algumas soluções funcionam melhor com diferentes materiais celulares; existem soluções específicas para prevenir degradação, dando mais tempo para o isolamento.

3. Isolamento do mRNA

   Use o kit de isolamento de mRNA bacteriano para isolar o mRNA na sua amostra. Com a maioria dos kits, é um processo simples e amigável; algumas horas depois você tem amostra de mRNA bacteriano pronta para identificação ou experimentos adicionais.