Técnica de perfusão

A técnica de perfusão proporciona uma fixação rápida e uniforme para todas as células individuais presentes no tecido . A 4 porcento de paraformaldeído fixador é passado através do sistema vascular de se obterem tecidos de interesse . O principal local alvo para a administração de drogas em um órgão em particular pode ser identificado com a ajuda desta técnica . Perfusão também ajudou cientistas para compreender a organização estrutural e funcional do cérebro humano . Coisas que você precisa
animal (rato ou macaco )
bomba de perfusão , copo
fixadora ( paraformaldeído 4 por cento )
agulhas de seringa
Perfusão gotejamento Set Fotografia Tesoura
Scalpel
Fórceps
salina
caixa de gelo de 0,9 por cento
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1

Prepare fresco 4 por cento paraformaldeído misturando 40 g de paraformaldeído em 800 ml de água. Aquece-se a solução a 60 ° C enquanto se agitava . Arrefece-se a solução a 4 ° C. Ajustar o pH para 9,5 com a ajuda de um medidor de pH . Para ajustar o pH, adicionar ácido acético glacial para obter o pH desejado
2

Configure a bomba de perfusão; . Anexar todas as peças de vidro e uma agulha de perfusão . Executar 100 ml de água da torneira através do tubo da bomba de perfusão para remover qualquer resíduo de peças de vidro . Coloque um copo de fixador em uma caixa de gelo.
3

Abra a extremidade do tubo de perfusão e colocá- la num copo de fixador. Dimensionar o volume de solução de acordo com o tamanho do animal . Agora ajuste a válvula de bomba de perfusão de , um gotejamento lento e constante . Feche a válvula . Encha o aparelho de perfusão com 0,9 por cento (peso /volume) de solução salina .
4

Estabelecer os instrumentos de cirurgia perto da mesa de operações. Dar uma injecção de anestesia para o animal de acordo com o seu peso corporal ( cetamina 0,5 mg /kg ) . Colocar o animal na mesa de operação com as costas para baixo.
5

Faça um corte com um bisturi , ao longo do comprimento do diafragma. Com as grandes tesoura , sem corte lateral para baixo , cortar os tecidos conjuntivos na parte inferior do diafragma . Expor o coração. Segurar o coração a bater com os fórceps e inserir uma agulha no interior do ventrículo esquerdo .
6

abrir a válvula da bomba de infusão para permitir o fluxo de solução salina a 0,9 por cento . Certifique-se que a solução está fluindo livremente e se o animal está vivo . O coração do animal deve ser continuamente batendo . Uma vez que o sangue é substituído por solução salina , alterar a solução a 4 porcento de paraformaldeído .
7

Pare a perfusão e dissecar um tecido de interesse . Mantenha o tecido no mesmo meio a 4 C.