Como determinar Anticorpos

O teste ELISA , ou ligada ao ensaio imunoenzimático , é o teste utilizado comercialmente mais comum para rastrear a presença de anticorpos . Este teste é utilizado para rastrear o uso de drogas , gravidez, AIDS e hepatite , entre outras condições . Este teste é popular por causa da facilidade de uso e baixo custo. Coisas que você precisa
amostra Serum
ELISA placa
Antígenos que conjugam o anticorpo sendo testado para
enzimas ou anticorpos ligados anticorpos secundários
Enzyme Linked indicador de mudança de cor
toalhas de papel
Óculos de
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1

Coloque um antígeno conhecido na superfície de vários dos poços.

Tampa cada poço com 50 microlitros de fluido IgG. Não perturbe os poços antes de 5 minutos já passou. Lavar os poços com água da torneira. Repetir o processo de lavagem cinco vezes . Toque no bem em uma toalha de papel para secá-la. Não limpe os poços.
2

Adicione amostras de fluido corporal , chamado de soro , para as placas. Estas amostras de fluidos corporais podem conter a solução de conjugado e concorrente para os poços . Isto irá ligar-se se os anticorpos estão presentes . As amostras de soro devem ser diluídas de modo a que eles se conjugar ao antigénio aplicado no passo 1 .
3

Adicionar uma proteína , tal como caseína , para os poços . Isso vai evitar que outras proteínas que não estão sendo testados para a aderência de placa.
4

Lave a placa por lavagem com água da torneira derramado gentilmente sobre os poços . Em seguida , toque no lado da placa numa toalha de papel para remover o excesso de água . Repita o processo de lavagem mais quatro vezes. Não limpe os poços. Adicione o anticorpo que coincide com o que está sendo testado para aos poços.
5

Lave a placa por lavagem com água da torneira derramado gentilmente sobre os poços . Em seguida , toque no lado da placa numa toalha de papel para remover o excesso de água . Não limpe os poços. Repita o processo de lavagem mais quatro vezes. Este processo de lavagem vai remover todos os antigénios que não está ligada a partir do poço . Os poços contêm agora apenas complexos anticorpo - antigénio que está a ser testado para . Lavar a placa . Isto irá remover todos os conjugados de enzimas e anticorpos não ligados.
6

Adicione anticorpos secundários , também chamados de anti -anticorpos , aos poços. Estes irão ficar com os anticorpos de detecção . Os anticorpos secundários são conjugados com o indicador de mudança de cor , e para o antigénio que foi adicionado ao poço no passo 1 .
7

Lavar a placa por enxaguamento com água da torneira vertida cuidadosamente sobre os poços . Em seguida , toque no lado da placa numa toalha de papel para remover o excesso de água . Não limpe os poços. Repetir o processo de lavagem mais quatro vezes . Isto irá remover enzimas anticorpos ligados extras que não estão vinculados .
8

Aplique um indicador de mudança de cor associada enzima para a chapa.

Isso fará com que os poços que têm os anticorpos serem testado para a alteração de cor .
9

Observar as cavidades da placa, para uma mudança de cor , que indicam a presença de anticorpo na amostra de fluido corporal .