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Técnica HPLC

HPLC significa cromatografia líquida de alta performance , um processo de análise qualitativa e quantitativa padrão usado nos laboratórios de análise . HPLC é fiável e reproduzível , o que torna a técnica preferida para a separação , identificação e quantificação de moléculas a partir de misturas complexas de ambos os componentes químicos e biológicos . Quatro componentes

A técnica de HPLC contém quatro componentes principais. Primeiro , o sistema de entrega de solvente ( a fase móvel ) que transporta as amostras através da coluna , é importante , como a polaridade afecta a capacidade do sistema para separar as moléculas . A coluna de cromatografia é normalmente uma coluna de vidro vertical que é cheio com um adsorvente . Em segundo lugar , o adsorvente ( também conhecido como a fase estacionária , uma vez que não se move ) é geralmente de gel de sílica ou alumina . Em terceiro lugar , o sistema de introdução da amostra é constituída por um tipo de porta de injecção para introduzir a amostra a ser analisada dentro do sistema de distribuição de solvente . O quarto componente é o detector.

Detectores

O tipo de detector usado depende do tipo de amostra os técnicos estão em execução e quais as moléculas que estão tentando isolar . Os critérios que o técnico utiliza na escolha de um detector incluem seletividade, relação sinal -ruído , limite de detecção , faixa linear , constante de tempo , a deriva eo volume celular. Detectores comumente usados ​​incluem detectores de ultravioleta visível , espectrômetros de massa , índices de refração, detectores de fluorescência ou dispositivos de luz evaporativo de espalhamento .
Procedimento

Ligue o detector, as bombas (que são utilizados para aumentar a pressão para deslocar a fase móvel através da fase estacionária ) e o computador que irá gravar e imprimir o cromatograma . Escolha os programas apropriados , a fim de coletar os dados desejados. Injectar a amostra no orifício de injecção . Fique de olho na pressão. Cada tipo de coluna tem uma pressão máxima ; não exceder essa separação ou não ocorrer . Imprima o cromatograma e analisar os resultados . No final de cada corrida , é importante lavar a porta de injeção para evitar o acúmulo , o que pode criar bloqueios.

Tipos

cromatografia de interação hidrofílica usa um polar ligado fase estacionária e uma fase não polar miscível em água móvel para separar moléculas com base na polaridade . Esta técnica tem a capacidade de separar amostras de ácidos , básicos e neutros em uma cromatografia de fase única chromatogram.Normal usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel não polar , não aquoso, para separar os isómeros estruturais (moléculas com a mesma fórmula molecular, que têm átomos unidos em diferentes maneiras ) cromatografia de fase reversa . é o tipo mais utilizado de HPLC. Ele usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar ligeiramente aquoso . Este método é normalmente utilizado pelas empresas farmacêuticas para qualificar drogas antes da cromatografia de exclusão release.Size separa as moléculas com base no seu tamanho e também pode determinar a estrutura de cromatografia de troca proteins.Ion baseia-se na atracção entre os iões do soluto e os locais carregados ligado na fase estacionária .
Utiliza

HPLC é útil numa variedade de aplicações . Ele pode ser usado para analisar os materiais farmacêuticos , o que é útil na pesquisa de novos fármacos , bem como a purificação das existentes . É também utilizado para analisar fluidos biológicos , pesticidas, explosivos e outros materiais . Embora seja uma técnica popular para a investigação biomédica , bioquímica e farmacêutica , mas também é usado nos cosméticos, alimentos , indústrias ambientais e energéticas .