Como se preparar placas de ágar

placas biologia molecular e bacteriologia uso de ágar a microorganismos , como bactérias cultura de experimentação . O ágar é o agente que se solidifica , ou géis , num meio nutriente líquido requerido pelo microrganismo para sobreviver e crescer . Uma vez transferido para uma placa de ágar , as bactérias crescem em colónias distintas ( se cultivadas em baixas concentrações ) ou manchas ( se cultivadas em concentrações elevadas ) e podem ser recolhidas para análise . Biólogos preparar placas de ágar , pois o processo exige o acesso aos reagentes de laboratório grau e máquinas e uma boa compreensão da biologia molecular e técnicas estéreis . Coisas que você precisa
Luvas
jaleco
Máscara facial
Bico de Bunsen
Laminar capela de fluxo
placas de Petri estéreis
10g
bacto - triptona 5g de extrato de levedura
15g agarose
NaOH 1N 1mL
água destilada estéril
garrafa de vidro
fita Autoclave Autoclave

suplementos , por exemplo, antibióticos como a ampicilina
Mostrar Mais instruções
O 1

Utilizar equipamento de proteção adequado , incluindo luvas, jaleco e uma máscara facial, e descontaminar todas as superfícies. Trabalhar ao lado de um bico de Bunsen, ou , de preferência , numa câmara de fluxo laminar estéril . Isso evita que contaminantes do ar de cair no agar .
2

Remova a pilha de placas de petri de suas embalagens , mas poupar para reembalar as placas de ágar . Rotular a superfície externa da cápsula ( não a tampa ) com o tipo de ágar e a data de preparação . Coloque as placas como uma única camada , sem tampa para fazer verter do agar mais fácil.
3

Misture o bacto - triptona, extrato de levedura e agarose juntos e , em seguida, adicionar o hidróxido de sódio (NaOH ) . Adicionar água destilada estéril para obter 1 litro de meios nutritivos . Transferir esta solução para uma garrafa de vidro com volume de , pelo menos, 1.5L . Vagamente parafuso na tampa da garrafa e rótulo a data de preparação e o nome dos meios de comunicação. Coloque uma tira de fita autoclave no frasco e autoclave por 25 minutos. Deixe a garrafa legal não inferior a 45 graus Celsius ( ou ele vai endurecer prematuramente ), mas não superior a 50 graus Celsius. Você pode armazenar garrafas de arrefeceu e solidificou agar a 4 graus Celsius e , em seguida, quente até liquefeito. Se for necessário para a sua experiência ou tipo de bactéria em particular , adicione o tipo ea quantidade de suplemento adequado, como antibióticos. Se a mídia estiver muito quente, os suplementos serão destruídos , de modo a verificar cuidadosamente a temperatura da mídia antes de prosseguir.
4

Despeje um volume suficiente de ágar para meio- encher o prato , enquanto o agar é ainda quente e liquefeito. Certifique-se de que a área de superfície é completamente coberto . Não despeje uma quantidade excessiva ou deixar que o agar chegar ao topo do prato. Mantenha os pratos em um ambiente estéril , permitindo que o bico de Bunsen ou fluxo laminar capô para ser executado continuamente . Permitir que as placas para definir e , em seguida, substituir as tampas.
5

Seque as placas de ágar por cerca de 30 minutos a uma hora em um forno definido não superior a 37 graus Celsius. Alternativamente, você pode deixá-los na câmara de fluxo laminar por três minutos ou em uma bancada de laboratório descontaminados em uma área de baixo tráfego que não é esfriado por um dia ou dois. A secagem das placas pára qualquer solução bacteriana colocada sobre a superfície de ágar de simplesmente diluir para fora e deslizar para fora , em vez de formar colônias que aderem ao agar .
6

armazenar cuidadosamente as placas no escuro e em 4 graus Celsius. Empilhe as placas de ágar secas com seus traseiros para permitir que você veja claramente os rótulos e para evitar que microorganismos e detritos caindo sobre a superfície do ágar e contaminá-los . Coloque os pratos de volta em sua embalagem , cubra com papel alumínio e fita o fechamento de embalagens. Rotular as placas embaladas com o seu conteúdo e data de preparação. Você pode armazenar as placas por até dois meses e deve descartá-las depois disso.