Protocolos de infecção por retrovírus

contendo um genoma de RNA que é encapsulado numa cápside e envelope lipídico , retrovírus contêm cadeias de polipeptídeos que ajudam a ligá-los aos receptores nas membranas das células do hospedeiro que infectam. Considerando que a informação hereditária da maioria das células está codificada no ADN , que de retrovírus está contida no ARN ; retrovírus também levar a enzima transcriptase reversa , permitindo-lhes aderir ao ADN do hospedeiro . Alguns protocolos são seguidos pelos laboratórios da infecção propositada da célula de ADN com esses vírus . Preparação do Laboratório

Certos equipamento de laboratório e os suprimentos são necessários para ajudar no processo de infecção retroviral . O equipamento inclui uma ajuda pipeta, uma pipeta - homem , uma cultura de tecidos capô, 37 graus Celsius e incubadoras Celsius 32 graus, e uma centrífuga Eppendorf . Fontes incluem placas de cultura de tecidos , uma pipeta Pasteur descartável , sobrenadante retroviral qualificado , polibrene esterilizada por filtração e sulfato de protamina esterilizada por filtração .
Preparando o celular para a Infecção

Prior a infecção , as células alvo deve ser dividida em uma placa de cultura de tecidos e incubou-se durante a noite numa incubadora com 37 graus Celsius , com cinco por cento de CO2 . A finalidade do período de incubação é de criar células que são de 50 % confluente . Preparação das células de antemão é necessário para assegurar que as células são optimizados para o processo de infecção . O Laboratório de Nolan na Universidade de Stanford recomenda que a infecção de células começam sempre começo por infectar as células NIH 3T3 para ajudar a otimizar os resultados do teste.
Infecção das células

Após o período de incubação é longo , os pesquisadores devem assegurar que as células são saudáveis e da confluência direita. Usando o capuz de cultura de tecidos , a matéria celular foi aspirado e um sobrenadante viral é aplicada às células . Uma vez aplicada , a placa deve ser gentilmente balançou para trás e para a frente para garantir que ele seja distribuído uniformemente . As células devem então ser , colocando-os na centrífuga Eppendorf e girando- a 2.500 rpm durante 90 minutos a uma temperatura de 30 graus Celsius, com a inoculação de rotação . Depois disso , as células devem ser incubados a 32 graus Celsius durante 1-2 dias. O vírus é, então, substituído com as células extraídas e colocada na incubadora a ser analisado em qualquer lugar de três a sete dias após a infecção inicial .