Protocolos de Purificação de MBP

MBP ou proteína de ligação a maltose é encontrado na bactéria Escherichia coli, que é parte da flora intestinal de seres humanos e animais . A purificação de MBP envolve uma série de procedimentos que visa separar constituintes da proteína . Em biologia molecular , MBP purificação é um processo fundamental para o estudo da estrutura e função da proteína . Protocolos de purificação incluem MBP MBP proteínas fundidas purificação, de pequena escala MBP- fusão e fusão maltose proteína de ligação de purificação tag. MBP Fused Proteínas Purificação

Durante este protocolo , os técnicos da lavagem de 20 ml de resina de amilose de polímero com a solução de atris a pH 7,4 , cloreto de sódio , mercaptoetanol ( ME ) e ácido etilenodiaminotetracético ( EDTA ) , de acordo com protocolos online. Amostras de células são adicionados , centrifugadas e analisadas em gel de electroforese . As amostras também são analisados em um cromatógrafo , onde os técnicos eluato ou observar constituintes da solução durante a passagem através da coluna de cromatografia.
Pequena Escala MBP- fusão Purificação de Proteínas

De acordo com da Universidade Hebraica de Jerusalém , os biólogos usam o isopropílico reagente bD- 1- thiogalactopyranoside (IPTG ) , cultura de células rotação por 10 minutos a 8.000 rotações por minuto a 39,2 graus centígrados. Mais tarde, remover o líquido sobrenadante e misturar tampão PBS frio para a amostra , que é dividida em vários tubos e centrifugada de novo . As amostras são, então, mantida a -112 graus Fahrenheit para posterior análise.
Maltose Binding Protein Fusão Tag Purificação

tags de afinidade são moléculas utilizadas em biologia molecular geneticamente para detectar e purificar proteínas . Este protocolo é um conjunto complexo de procedimentos dividido em três fases , que incluem a construção de marcador de proteína polihistidina ( HisMBP ); uma experiência piloto para avaliar a solubilidade da proteína ; e a purificação em larga escala de moléculas de MBP , de acordo com a natureza protocolos . Além das amostras de E. coli , os técnicos utilizam ampicilina , canamicina , IPTG , anidrotetraciclina , mono-hidrato de glicose , tampão de lise celular , a polimerase de ADN , iniciadores de PCR , Tris-acetato - EDTA e brometo de etídio .