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Protocolo de Coloração DAPI

DAPI representa o químico 4' - 6 - diamidino - 2 - fenilindol , e é usado para corar o ADN de cadeia dupla . O composto forma complexos fluorescentes azuis com núcleos das células e por isso é utilizado comumente para realçar a estrutura das células . O tipo ea densidade de coloração também pode identificar as células mortas ou a morrer . Preparação da solução DAPI

A solução DAPI primeiro tem de ser diluído para uma solução de trabalho . Por exemplo , 10 mg do produto da Invitrogen DAPI deve ser misturado com 2 mL de água desionizada , e em seguida, diluiu-se ainda mais a concentração de 300 nano - molar ( instruções estarão presentes no produto ) com solução salina tamponada com fosfato ( PBS ) .

preparação da amostra

Fixar a amostra , conforme apropriado para o tipo de amostra a ser testada em um slide. Adicionar 300 microlitros da solução de trabalho de DAPI para a amostra e incuba-se durante um a cinco minutos. Lavar a lâmina com PBS.
Analisando

Use um microscópio de fluorescência de olhar para a amostra montado em slide. Os núcleos DAPI - manchadas podem ser identificados por uma fluorescência azul.