Como para fazer placas de agar LB

Agar é uma substância gelatinosa , fabricado a partir de algas vermelhas e usados para uma variedade de fins . Uma das suas utilizações comuns como é um meio de cultura para as bactérias . LB agar agar nutriente é que foi combinado com o caldo de lisogenia ( LB ) . É uma falácia comum de que LB significa Luria - Bertani . No entanto , o seu inventor, Giuseppe Bertani , afirma em seu artigo " Lisogenia em meados do século XX : P1 , P2, e outros sistemas experimentais ", que as iniciais foram sempre a intenção de ficar para caldo lisogenia , não seu nome e de sua coresearcher , Salvador Luria . Agar LB é versátil e bastante simples de fazer . Coisas que você precisa
para 1 L de meio acabado:
Escala e papéis com peso ou bandejas
1 -L cilindro graduado
1 L de água destilada ou deionizada Página 2 -L Erlenmeyer
10 g de triptona
5 g de extrato de levedura
5 g de sal não iodado mesa
15 g agar
folha de alumínio
forno luvas impermeáveis
Autoclave ou panela de pressão
placas de Petri estéril
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O 1 Use uma garrafa de Erlenmeyer que contém o dobro do volume do meio que você pretende preparar.

Coloque o triptona, extrato de levedura e sal no Erlenmeyer .
2 Preste atenção para a pressão da autoclave ou panela de pressão quando a esterilização .

Adicione a água destilada ou deionizada e senhor ou agitar para dissolver a maioria dos ingredientes secos.
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Adicionar o ágar e continuarão a sacudir ou agitar. Todo o agar não se dissolverá , mas é importante que você obtenha a maior parte dela na solução. Evite grandes aglomerações de não dissolvido agar estabelecendo-se em parte inferior do seu frasco.
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selar a abertura do frasco com papel alumínio.
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Colocar o balão em autoclave - recipiente seguro .
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Despeje cerca de 1 cm de água no recipiente .
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Coloque o recipiente e frasco para a autoclave. Definir a autoclave para um ciclo de líquido e para esterilizar , pelo menos, 20 minutos. Se você estiver usando uma panela de pressão para a esterilização , vá para a Etapa 8. Caso contrário, pule para o Passo 10.
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Se você estiver usando uma panela de pressão , coloque uma pequena quantidade de água na panela e colocar o balão na água. Não tente esterilizar mais de 250 mL de cada vez utilizando este método.
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Leve a panela de pressão para cerca de 20 psi e esterilizar por cerca de 30 minutos.
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Retirar o balão da autoclave ou panela de pressão , tomando cuidado para que o frasco vai ser muito quente.
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Agitar o frasco uma vez esterilização está concluída. Isso irá distribuir o agar mais uniformemente por toda a sua solução.
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Coloque o frasco sobre uma superfície adequada e deixe esfriar um pouco . Se você preparou 1 L ou mais de meio, dar-lhe um redemoinho suave a cada 10 a 20 minutos . Você será capaz de dizer que o meio tenha arrefecido o suficiente quando você pode segurar a parte de trás de seus dedos contra o balão durante cerca de 2 segundos sem que seja desconfortavelmente quente ao toque. Espere cerca de 15 a 20 minutos antes de tentar isso.
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Coloque uma placa de Petri sobre uma superfície plana . Suavemente levantar a tampa de um ângulo , de modo que a maior parte do prato é deixado coberta . Não levante a tampa em linha reta fora da placa.
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Despeje o meio do balão para a placa de Petri até o prato é cerca de metade cheio .
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substituir imediatamente a tampa , coloque o prato de lado e passar para a próxima até que todas as placas desejadas tenham sido preenchidas. As placas vão completar a sua solidificação em cerca de 30 minutos.
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Coloque as placas de Petri no saco estéril em que chegaram ou outro recipiente adequado , estéril , se você não está inoculando -los imediatamente. Selar o recipiente para preservar a umidade . Rotular as placas , se desejar. Se você estiver armazenando as placas , eles devem ser mantidos a uma temperatura de cerca de 39 a 40 graus F.