Como Stain Agarose Gels

visualização de ácido nucleico ou proteína é essencial na realização de electroforese em gel de agarose . Se você trabalha sem manchar o gel , você não será capaz de ver onde a amostra que você está testando chegou , e, portanto, medidas de tamanho molecular , por exemplo, será severamente restringida. Manchar o gel utilizando um corante comum , bem testado tal como o brometo de etídio ( EtBr ) que emite fluorescência sob luz ultravioleta ( UV) quando intercalado em moléculas de ADN ou de ARN . O corante irá ajudá-lo na realização de sua experiência , mostrando-se as moléculas na sua amostra como marcas azuis escuros. Coisas que você precisa Luvas de segurança e óculos de

em gel de agarose
brometo de etídio
Pipeta (Gilson para pequenas quantidades )
Loading tampão
Show Mais instruções

1

Usar luvas de segurança que são finos , mas de proteção e permitir que seus dedos e mãos movimento irrestrito . Use uma pequena pipeta para tirar algumas EtBr (ou mancha equivalente) fora de seu recipiente.
2

Adicione 0,5 microgramas por mililitro de sua mancha escolhido para sua amostra. Cobrir a amostra e misturar manualmente . Vários shakes deve ser suficiente.
3

Adicione um tampão de carregamento de carga negativa para a mistura com uma pipeta . Isso permite que a amostra corada para ser visto a olho nu , à luz natural e elimina a necessidade de caros, UV prejudicial que de outra forma degradar as moléculas em que você está interessado. Xilenocianol é um tampão de carga utilizada , mas os outros estão disponíveis . Certifique-se de selecionar um tampão de carregamento que serão executados na mesma velocidade como a molécula que você está medindo . Xilenocianol corre na mesma velocidade como fragmentos de DNA que são 5000 pares de bases (pb) de comprimento.
4

Use uma pipeta limpa para aplicar o seu exemplo aprimorado para os poços no início de seu gel de agarose . O volume de aplicar depende do tamanho dos pentes de gel ( bem espessura e comprimento e espessura de gel ) . Manchar sua amostra e não o controle para que você possa determinar os parâmetros que você está interessado (tais como peso molecular ) correcta e eficaz.
5

Alternativamente, realizar Sul Blotting como uma forma de visualizar a sua amostra . Transferir o ADN para uma membrana de nitrocelulose . Expô-la a uma sonda de hibridação . Esta não é a coloração , como tal, mas fornece uma alternativa adequada , conforme descrito pelo Access Excellence.