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Co -imunoprecipitação protocolo

protocolo de co- imunoprecipitação ( Co - PI ) é um procedimento largamente utilizado para analisar a interacção de proteínas . O procedimento é geralmente constituído por três etapas . Um anticorpo é introduzido a um lisado celular , o complexo anticorpo - proteína é quimicamente ligado e da proteína é identificado através de análise . Resumo co-imunoprecipitação

Co - PI é constituído por uma série de passos para garantir resultados precisos . O primeiro passo requer um anticorpo específico para a proteína a ser adicionada . Na segunda etapa , a proteína - G ou proteína A- Sepharose usado para ligar o complexo de anticorpo - proteína . Finalmente , a sequenciação da proteína purificada a banda , ou a análise de mancha de Western , é usada para identificar a proteína co -precipitado .
Passos gerais

O protocolo pode ser dividido em três etapas gerais em termos de mecânica do processo . O primeiro passo é o fluxo de trabalho para completar o procedimento no menor espaço de tempo . O segundo passo é considerações gerais para o procedimento. O passo final é solução de problemas.
Passos específicos

O fluxo de trabalho começa com a preparação da cultura para a análise borrando e conclui com a determinação da presença de qualquer proteínas . Considerações gerais consistem em etapas fundamentais, tais como pré - lavagem , a escolha de tampões e de selecção de Proteína A ou Proteína G- Resina . Solução de problemas lida com questões como nenhuma detecção de proteínas, ligação dos anticorpos para as proteínas, os fragmentos de anticorpos e da possibilidade de uma mal sucedida Co- PI.