Pontas de cultura de tecidos

A cultura de tecidos é a propagação de células em um meio de crescimento líquido no laboratório para diversos fins científicos . Por exemplo , culturas de tecidos são utilizados para o diagnóstico de doenças genéticas , como um meio para o crescimento de agentes patogénicos intracelulares , tais como bactérias ou vírus, ou em investigações sobre as próprias células. Células de Cultura de Tecidos

Algumas células aderir ao fundo dos pratos de Petri ou permanecer em suspensão no líquido . As células podem ser de origem vegetal ou animal . As células utilizadas nas culturas de tecidos podem ser células primárias , o que significa que foram recolhidas directamente a partir de um organismo, ou de uma linha celular que foi mantida em cultura . As linhas celulares são muitas vezes células cancerosas, e isso deve ser considerado quando do planejamento ou interpretar experimentos.
Tratar células suavemente

células aderentes são removidas de sua placa de Petri para a passagem por raspagem ou com uma protease , geralmente de tripsina e de EDTA . Raspar mata muitas células e devem ser usadas apenas quando a preparação de lisados celulares (preparados líquidos de conteúdo da célula para análise ) ou quando a tripsina /EDTA deve absolutamente ser evitada .

Trypsinizing remove não apenas as proteínas que aderem células ao prato mas a maioria das outras proteínas da membrana da célula , também . Células bola para cima e levar algum tempo , geralmente durante a noite, para restabelecer um vínculo com o prato. Adição de uma quantidade mínima de tripsina - cerca de 1 mL de um balão de 25cm2 - balanço do balão , durante cinco segundos ou menos, para o revestimento de monocamada e , em seguida, vertendo ou aspirando o fora o excesso de tripsina vai reduzir a quantidade de tripsina a que a monocamada é exposta . Deixe as células descansar na incubadora durante tripsinização .

Depois que as células deslizar para fora do fundo do prato , adicione mídia com soro e aspirar o lisado cima e para baixo a pipeta suavemente . Deixe um pouco de mídia para permanecer no prato , como você pipeta cima e para baixo várias vezes para quebrar aglomerados e obter uma suspensão uniforme.

Não aspire bolhas na pipeta . Além disso, não misture vigorosamente ou vortex a suspensão de células ; as células são muito frágeis neste estado enrolado -up.
ao calor inactivar ou não aquecer Inativar

Quando técnicas de cultura de células estavam em sua infância , soro fetal bovino ( FBS ), foi conhecido por conter proteínas do complemento , que são proteínas do sistema imunitário que as células lisam . Proteínas do complemento não são desejáveis , em cultura de células . FBS- inativação de calor de 56 graus Celsius por 30 minutos irá processar proteínas do complemento inativos. Pré-aquecimento FBS a 37 º C também é suficiente para inativar proteínas do complemento .

Nos primeiros dias , o calor inativar FBS também matou micoplasma e outros contaminantes. No momento , a esterilização do filtro foi realizada com filtros 0.45um . Hoje, nós filtrar esterilizar FBS e mídia através 0.1um ou filtros mesmo 0.04um . Não micoplasma vai escorregar através desse

Isso nos deixa a questão de saber se a aquecer inativar inativação

calor degrada todos os componentes dos FBS - . . , Tais como vitaminas , aminoácidos e fatores de crescimento - . possivelmente abaixo do limiar de algumas linhas de células mimado

Se você estiver trabalhando com uma linha de células de crescimento lento ou mimado , considere apenas filtrar esterilização seus FBS . Você pode achar isso aumenta a robustez de suas células.