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Protocolos para Hoechst Coloração

As manchas Hoechst são corantes fluorescentes utilizados para a rotulagem de DNA e RNA por meio de microscopia de fluorescência e citometria de fluxo técnicas . Hoechst 33258 e Hoechst 33342 são os mais utilizados destas manchas. Eles têm a capacidade de se ligar a moléculas de DNA , fazendo com que os núcleos e as mitocôndrias apareça fluorescente sob luz ultravioleta . Protocolos para coloração Hoechst são prática comum em laboratórios de biotecnologia e genética , e incluem técnicas de coloração de células usando tanto Hoechst 33258 e Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC Coloração e Stem Cell Purificação Protocolo

Este protocolo é usado para corar as células de camundongos medula óssea. Técnicos preparar amostra de medula óssea com uma solução de HBSS + sal , tampão HEPES e soro fetal de vitelo . Eles girar a solução e adicionar a um meio DMEM pré -aquecido . Hoechst mancha é em seguida adicionado . A solução é colocada num banho de água a 98,6 graus Fahrenheit durante exactamente 90 minutos , relata o Departamento de Imunologia da Universidade de Pittsburgh . Segmentos de DNA parecem fluorescente sob um citômetro .
Hoechst 33342 DNA Coloração

Durante este protocolo , os técnicos suspenso Hoechst 33342 mancha em água destilada , adicionar 2 por cento de soro fetal bovino para a amostra de células , mantendo o pH a 7,2 com a ajuda de uma solução tampão . As células são então incubadas a 98,6 graus F por uma hora, e imediatamente analisada com um equipamento chamado citômetro .

Stained DNA é, então, visível e fluorescente, de acordo com a Universidade de Michigan Health System .


Detecção de DNA Usando o DNA-binding Fluorocromo Hoechst 33258

Este protocolos usado um equipamento chamado espectrofotômetro para analisar segmentos de DNA e RNA. Técnicos usam Hoechst 33258 trabalhando amostras de DNA de solução e de timo de bezerro . Eles também fazem uma solução separada utilizando a amostra de DNA e um produto químico chamado brometo de etídio. Mais tarde, eles se comparam os resultados de coloração de células em ambos os meios, usando um espectrofotômetro , de acordo com protocolos atuais em Citometria .