Os métodos para medição NADPH - oxidase

A enzima NADPH oxidase é identificado como um produtor de espécies reativas de oxigênio durante os processos , incluindo o crescimento de células do músculo liso vascular . Estas espécies reactivas estão ligados a uma variedade de doenças, incluindo a hipertensão , diabetes , cancro e inflamação , os métodos para a monitorização da actividade desta enzima é essencial para o desenvolvimento eventual tratamento . NADPH oxidase

NADPH oxidase pertence a uma família de enzimas que auxiliam na transferência de elétrons entre NADPH e oxigênio. No entanto, NADPH oxidase tem a capacidade única de produzir espécies reativas de oxigênio a partir desta reação , em comparação com outros membros da família onde as espécies reativas de oxigênio é gerado através de outros meios . Um complexo proteico multimérico , NADPH oxidase consiste no B558 flavocytochrome ligada à membrana , que é utilizado como um marcador de medição .
Espécies reactivas de oxigénio ( ROS ) Geração

Como a principal fonte de ROS , particularmente peróxido de hidrogênio, NADPH oxidase produz quantidades pequenas, mas consistentes através da sua isoforma expressa em vasos sanguíneos , que estão envolvidos em processos de sinalização . Esta produção consistente pode eventualmente sobrecarregar o sistema antioxidante natural , causando uma perda de compostos de proteção, como o óxido nítrico , ea geração de ainda mais poderoso ROS .
Chemiluminescence Método

Chemiluminescence permite a medição altamente sensível , automatizado de atividade da NADPH oxidase sobre uma gama de concentrações . Durante este processo , o substrato de NADPH é adicionado a uma amostra de tecido contendo NADPH -oxidase . Após a reacção , ROS são gerados e reage com a lucigenina composto para produzir um efeito de quimioluminescência , que é medido . A luminescência é directamente proporcional à actividade da NADPH-oxidase , tal como a enzima determina a velocidade da reacção .
Cinética Ensaio através de citometria de fluxo

Neste método , são analisadas amostras de tecido através de citometria de fluxo . A medula óssea é separado a partir da amostra utilizando uma solução salina equilibrada de Hanks . As colorações específicas e anticorpos de detecção são adicionados à amostra em tubos de poliestireno . A amostra é então incubada , lavada com solução salina equilibrada de Hanks , rotulado com sondas moleculares e preparado a partir de citometria de fluxo . Os tubos de controlo são também feitos para comparação e para calibrar o citómetro de fluxo . A máquina é então correu e medições registradas.