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Protocolo para a transfecção de GFP

O uso da Proteína Fluorescente Verde revolucionou a biologia molecular e celular , que permitiu aos pesquisadores visualizar células e proteínas de forma nunca antes possível. Seu impacto sobre a pesquisa científica foi tão profunda que , em 2008, Osamu Shimomura ganhou o Prêmio Nobel de Química por sua descoberta e isolamento de GFP de água-viva fluorescente. Definições

Um gene é a sequência de ácido desoxirribonucleico em células, que é responsável pela produção de uma proteína específica . Um plasmídeo é um pedaço de ADN que contém um gene de interesse , tal como GFP . A transfecção é o método para a introdução de um plasmídeo em células .
Métodos

Transfecção tipicamente envolve a mistura de um DNA de plasmídeo contendo um gene tal como GFP com lípidos ou sais . As células são expostas a esta solução , o que cria orifícios na membrana das células , permitindo o plasmídeo na célula em que o gene pode ser expresso como uma proteína . Kits comerciais de transfecção estão disponíveis , ou os reagentes podem ser feitos em laboratório . A escolha do método de transfecção depende do tipo de células e plasmídeos utilizados. A GFP é visualizado e monitorado com equipamentos que detecta fluorescência.
Usa

GFP é geralmente ligado a uma proteína de interesse para a transfecção . O Comitê Nobel destacou o rastreamento de " dano do nervo celular durante a doença de Alzheimer " e " como as células beta produtoras de insulina são criadas no pâncreas de um embrião em crescimento ", como exemplos.